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      白介素1βELISA試劑盒ELISA Kit

      更新時(shí)間:2018-10-08點(diǎn)擊次數(shù):495

      白介素1βELISA試劑盒 ELISA Kit

      elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理: (1). 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。 (2). 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。 (3). 酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。 (4). 受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。 (5). 此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。 (6). 加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重復(fù)性好。以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。

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      白介素1βELISA試劑盒試劑盒(多種屬)行業(yè)操作流程如下:(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。 (2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF工作液50μl。 (5)酶標(biāo)板置37℃箱的濕盒內(nèi),孵育60min。 (6)洗板,同(4)。 (7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔工作液 100μl。 (8)酶標(biāo)板置37℃箱的濕盒內(nèi),孵育60min。 (9)洗板,同(4)。 (10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 (11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 (12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以由容器上的劃痕或指印等造成的光。(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定。

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      編輯:小檀20181008

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